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酶联免疫吸附法

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楼主艾米尔儿童摄影 2014-11-30 13:37:02 引用

aimier123

酶联免疫吸附法(enzyme-linked immun。s。rbent assay,ELISA)以过氧化物酶或碱性磷酸酶标记抗体作为检测试剂的ELISA有多种变形。如同免疫荧光法一样,血小板可以悬浮、粘附或溶解液形式加以测定。直接法ELISA可测定PAIg,间接法ELISA可测定血清Ig。竞争性酶联免疫法(c。mpetitive enzyme-linked immun。assay,CELIA),可以定量地测定PAIg。
     ELISA在测定血清抗体时的常见问题之一是特异性。用完整血小板作为抗原时,血小板膜上所有的抗原都能参加反应,而待测血清中又含有多种特异性的抗体。特别是同种免疫反应的血清中往往含有一种以上的同种抗体。通常有抗HLA物质抗体、抗AB。抗体和抗血小板特异抗原抗体等。为了区分抗HLA抗体和抗血小板特异抗原抗体,可采用氯喹或酸处理的方法。在20%浓度的氯喹溶液中或在pH3.0时,HLA抗原可被从血小板上洗脱下来,而血小板特异抗原和血小板的形态基本没有改变。通过处理前后血小板的对照,可估计血清同时含有抗HLA和抗血小板特异抗原两种抗体或只是其中一种。研究的深入,血小板糖蛋白在血小板免疫反应中的重要作用已日益清楚,一部分自身抗体和绝大部分的抗血小板特异抗原的同种抗体,其抗原决定簇均位于主要的血小板糖蛋白。因此这类抗体的检测可以用抗原捕获(antigen-capture)法来提高检测特异性和敏感性。抗原捕获法的基本原理是通过抗血小板糖蛋白的单抗,把含有待测抗原决定簇的糖蛋白分子固相化于微孔或塑料小珠上,用这些纯化和浓集了的抗原来测定血清中的相应抗体。

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